纯化过程快速判断蛋白洗脱程度
蛋白纯化新手，求助两个小分子量蛋白怎么分离？
蛋白纯化新手，求助两个小分子量蛋白怎么分离？
1、透析与超滤透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开.超滤法是利用高压力或离心力,强使水和其他小的溶质分子通过半透膜,而蛋白质留在膜上,可选择不同孔径的泸膜截留不同分子量的蛋白质.2、凝胶过滤法也称分子排阻层析或分子筛层析,这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一.柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝胶（Sephadex ged）和琼脂糖凝胶（agarose gel）.大概原理是：把三种分子量不同的物质放到充满凝胶颗粒的层析柱中，然后用缓冲液洗脱。
大分子会以较快的速度首先流出层析柱，而小分子需要花费较长的时间才能流经柱床，从而达到分离不同分子量蛋白质的目的。
蛋白纯化过镍柱以后为什么会沉淀？
蛋白浓度过高的时候，会发生聚集而沉淀。有些不易溶蛋白随着镍柱的富集作用就会沉淀。由于不知道你实验目的，简单认为你要纯化表达的蛋白，解决方法：
1. 换更强亲水肽段载体pet50（从酶切链接开始做），但是这样会在表达出来蛋白中增加非目的蛋白成分2. 不要用最佳浓度咪唑洗脱，用稍差一些的，这样洗脱出来蛋白速度慢，浓度低，但是看你是否对浓度要求了。
3. 重新设计引物把输水片段删掉，这样增加可溶性再表达纯化4. 考虑在沉淀里加入稀盐，促溶。但不知对你实验是否有影响
阳离子交换剂层析洗脱顺序？
阳离子交换柱层析的洗脱顺序是先酸、后中性、然后再碱性，阳离子交换柱层析的洗脱需要用到离子交换剂，阳离子交换柱一般都是使用HCL溶液洗脱。
阳离子交换柱层析的原理
离子交换柱层析是使用离子交换剂（一种具有离子交换特性的物质）作为固定相，用于与流动相中的特定离子进行可逆交换，从而分离离子型混合物的层析方法
离子交换柱层析主要依赖于电荷之间的相互作用，并利用带电分子的电荷之间的细微差异进行分离。它具有很高的分离能力。离子交换柱层析广泛用于生物聚合物的分离，中间纯化和纯化过程中，因为几乎所有生物聚合物都是极性的并且可以带电荷。
离子交换剂的类型
将带电的活性基团引入惰性载体
取决于活性官能团的不同电荷的特性
阳离子交换剂
与带负电荷的阳离子交换
阴离子交换剂
带正电并交换阴离子
阴离子交换树脂对化学物质和热的稳定性不如阳离子交换树脂。
阳离子交换树脂的洗脱顺序：
用于水处理的阳离子交换柱层析的洗脱顺序：酸lt中性lt碱性。
阳离子交换树脂的洗脱顺序主要与树脂的亲和力有关，最重要的是静电吸引，其次是疏水相互作用。
树脂颗粒越大，就需要更多的洗脱液才可达到洗脱效果。
在稀溶液中，树脂上的电荷越高，树脂的亲和力越高。
树脂的洗脱与溶液中的离子浓度有关，浓度越低，洗脱就越容易，浓度越高，洗脱就越困难。
阳离子交换树脂通常使用盐酸溶液作为洗脱剂，但是阴离子交换树脂具有三种洗脱剂：盐酸溶液，氯化钠和氢氧化钠溶液。三种都可以用作阴离子树脂的洗脱液，对于某些具有相似分配系数的离子，可以使用含有有机络合剂或有机溶剂的洗脱液。这样可以有效地提高选择性。
阳离子交换树脂可用HCL溶液洗脱。用HCl溶液洗脱后，阳离子树脂可转化为氢树脂，阴离子交换树脂可使用NaCl或NaOH溶液作为洗脱剂，并可转化为氯树脂或氢氧化物。树脂打字后，使用HCL溶液，NaCl或NaOH溶液作为洗脱液，树脂再生过程完成，不需要再生，并且即使在用纯水清洗后也可以使用，因此非常方便。